星空体育国际米兰超低溫保存方法概述

　　微生物可以低溫儲(chu) 存，低溫儲(chu) 存方法在應用領域有廣泛的微生物儲(chu) 存方法。營養(yang) 混亂(luan) 的微生物種，如其他儲(chu) 存方法不能堅持其活力(如植物病原細菌)，一般可以低溫儲(chu) 存(ATCC1983);Halliday，Baker1985)。

　　這種方法是以較慢的冷凍速度(1℃/分鍾)冷藏小管或安瓿中的細胞，直到-150℃，然後將這些小管保存在-150℃～-在196℃的液氮中。低溫冷凍保護劑不同於(yu) 凍幹法中使用的冷凍劑。甘油(10%)是一種常見的ATCC、由二甲亞(ya) 碸(5%)和培養(yang) 液製成的混合物儲(chu) 存在大多數細胞株中。

　　這種化學物質進入細胞可以防止內(nei) 膜的冷藏損傷(shang) 。保存在低溫容器中的細胞在恢複時必須小心操作。當小管被加熱時，霜凍會(hui) 殺死細胞，適當的操作可以防止這種事故。隻要靈巧地冷凍和清潔試驗產(chan) 品，就可以減少活力的丟(diu) 失。方法是將密封的小管靈巧地放入37℃的水中，直到所有的冰都溶解，然後打開支管，將內(nei) 容物轉移到培養(yang) 液中。低溫儲(chu) 存的微生物必須始終保存在非常低的溫度環境中，因此需要星空体育国际米兰。在長期儲(chu) 存的過程中，必須經常注意填充液氮。

　　這種儲(chu) 存方法比凍幹法需要更多的資金，包括保持儲(chu) 存溫度所需的勞動力和液氮。

　　病毒低溫儲(chu) 存所需材料有：熱收縮塑料管(NuncCryoflex)，星空体育国际米兰、防割手套和麵具、記號筆、汽體(ti) 噴燈、液氮保溫瓶。

　　2方法

　　(1)切一段兩(liang) 側(ce) 各超過冷凍管長度2cm的熱收縮塑料管。幹式星空体育国际米兰

　　(2)冰浴幾分鍾(分配培養(yang) 的上清培養(yang) 液，或分配培養(yang) 液中的細胞溶解物)，用殺菌移液管將0.2ml冰浴的上清懸液分配到冷凍管中，擰緊外蓋。

　　(3)將病毒冷凍管放入熱收縮塑料管中間，刺入適當的標簽。

　　(4)用噴燈小心加熱熱收縮塑料管，並將其包裹在冷凍管中。切記不要用過高的溫度加熱熱收縮塑料管。

　　(5)小心加熱熱縮塑料管兩(liang) 側(ce) ，用大鑷子夾住管端口，直至完全密封。

　　(6)將密封好的冷凍管迅速冷藏在配有液氮的保溫瓶中(操作時需要戴口罩和手套)。

　　(7)將冷藏的冷凍管放入星空体育国际米兰的方格中，記錄樣品的具體(ti) 儲(chu) 存方向、實驗序列號和儲(chu) 存日期。

　　(8)需要時間，靈巧地從(cong) 星空体育国际米兰中取下試品，放入37℃水浴箱冷凍後，用解剖刀頭將熱收縮塑料管切割在冷凍管的矽化墊圈處。擰開冷凍管外蓋時，不要求去除熱收縮塑料管。